روش تایپ پرایمر اختصاصی توالی (SSP):
تایپ پرایمر اختصاصی توالی (SSP) یک روش آزمایشگاهی است که برای انجام تست‌های تایپ HLA استفاده می‌شود. این روش از واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) برای تکثیر نواحی خاصی از ژن های HLA استفاده می کند و به دنبال آن هیبریداسیون با آغازگرهای خاصی که فقط برای تقویت آلل های HLA خاص طراحی شده اند، انجام می شود.
روش تایپ SSP شامل مراحل زیر است:
- استخراج DNA: نمونه ای از DNA از خون یا نمونه بافت بیمار استخراج می شود.
- تقویت PCR: PCR برای تقویت مناطق خاصی از ژن های HLA انجام می شود. پرایمرهای مورد استفاده در واکنش PCR به گونه ای طراحی شده اند که برای برخی از آلل های HLA خاص باشند. واکنش PCR در یک ترموسایکلر انجام می شود که در دماهای مختلف چرخه می کند تا DNA را دناتوره کند، پرایمرها را بازپخت و رشته های DNA را گسترش دهد.
- الکتروفورز ژل: محصولات PCR بر اساس اندازه با استفاده از الکتروفورز ژل جدا می شوند. محصولات PCR روی ژل بارگذاری می‌شوند و جریان الکتریکی اعمال می‌شود که باعث می‌شود قطعات DNA از طریق ژل مهاجرت کنند. سپس قطعات با استفاده از رنگ یا رنگ فلورسنت تجسم می شوند.
- هیبریداسیون: محصولات PCR سپس با پرایمرهای خاصی که برای تقویت تنها آلل های HLA خاص طراحی شده اند، هیبرید می شوند. پرایمرها با یک رنگ یا آنزیم فلورسنت نشاندار می شوند که امکان تشخیص آلل خاص HLA را فراهم می کند.
- تجزیه و تحلیل: نتایج حاصل از روش SSP برای تعیین نوع HLA بیمار تجزیه و تحلیل می شود. وجود یا عدم وجود آلل های خاص HLA با وجود یا عدم وجود یک نوار خاص روی ژل یا با وجود یا عدم وجود یک سیگنال خاص از پرایمرهای نشاندار مشخص می شود.
تایپ SSP روشی نسبتاً ساده و مقرون به صرفه برای تایپ HLA است، اما محدودیت هایی دارد. فقط می تواند آلل های HLA شناخته شده را تشخیص دهد و ممکن است قادر به تشخیص آلل های نادر یا جدید نباشد. علاوه بر این، این روش نیازمند طراحی دقیق پرایمر و بهینه‌سازی برای اطمینان از تقویت دقیق و خاص آلل‌های HLA هدف است.
