Test cost: 2,932,170 Rial

Status of test presentation: Existing

Sample type:

خون تام حاوی هپارین

(هپارین بیشتر استفاده می شود، زیرا با واکنش شیمیایی که در طول آزمایش رخ می دهد تداخل نمی کند.)

Sample size:

5 ml

Sample storage:

6 ساعت در دمای محیط ( نباید در یخچال نگهداری شود)

Sample shipping:

Room temperature 18-25 °C

Necessary information about the patient:

سن بيمار, مصرف دارو ,سابقه بيماري

Necessary preparation before sampling:

1. نیاز به ناشتایی ندارد
2. در صورت نمونه گیری در خارج از آزمایشگاه کمتر از یک ساعت نمونه را به آزمایشگاه منتقل کنید.
3. این آزمایش در دو ماه اول پس از تولد قابل انجام نمی باشد.

Clinical information:

تست جدید DHR (جایگزینی حساس تر از NBT) جهت بررسی فاگوسیتوز در کودکان و افراد مبتلا به بیماری های گرانولو ماتوز مزمن

 

 بیماری گرانولوماتوز مزمن (CGD; Chronic granulomatous disease) یکی بیماری‌های نقص ایمنی است که به دو فرم وابسته به کروموزوم X مغلوب (در دوسوم‌ موارد) یا اتوزومال مغلوب (در یک‌سوم موارد) به ارث می‌رسد. 
علت این بیماری جهش در یکی از ژن‌های کدکننده کمپلکس‌های پروتئینی مسئول تولید اکسیژن سوپراکسید (O-) با نام کمپلکس اکسیداز فاگوسیتی (Phox) یا آنزیم NADPH اکسیداز می‌باشد.
کمپلکس آنزیمی NADPH اکسیداز بصورت داخل غشایی در فاگوسیت‌های تک‌هسته‌ای و نوتروفیل‌ها وجود دارد. از نظر ساختاری دارای یک زیرواحد داخل غشایی کاتالیتیک دارای حلقه هِم (Heme) با نام gp91phox (یا زیرواحد آلفا که در بازوی کوتاه کروموزوم X کد می‌شود) می‌باشد که به زیر واحد تراغشایی دیگری با نام p22phox (یا زیرواحد بتا که در کروموزوم ۱۶ کد می‌شود) متصل می‌گردد.
جهش زیر واحد آلفا باعث ایجاد فرم وابسته به کروموزوم X بیماری و جهش در سایر اجزاء آنزیم منجر به فرم اتوزومال مغلوب بیماری می‌گردد.
در طی پاسخ‌های دفاعی بدن در برابر میکروب‌ها، فعال‌سازی کمپلکس آنزیمی فوق با احیاء اکسیژن مولکولی تولید ترکیبات ROS مثل رادیکال های پراکسید یا سوپراکسید (O2-) می‌کند. رادیکال‌های آزاد اکسیژن در مسیری در نهایت به اسیدهای هیپوهالوس تبدیل می‌شود که برای باکتری سمی است. این فرآیند را انفجار تنفسی (Respiratory burst) می‌گویند.
بیماری CGD اغلب در دوران کودکی ایجاد شده و با عفونت‌های راجعه قارچی و باکتری‌های داخل‌سلولی کاتالاز مثبت (که پراکسید هیدروژن را تخریب می‌کنند) همراه است. بعلت نقص در کشتن میکروب‌های فاگوسیت‌شده، لنفوسیت‌های T باعث فعال‌ کردن مداوم و مزمن ماکروفاژ‌ها شده و سبب ایجاد گرانولوما می‌شود.
در این بیماری به دلیل از بین بردن ناقص میکروب ها به علت اختلال در یکی از اجزاء کمپلکس NADPH oxidase ایجاد می شود که در این حالت فاگوسیتوز به طور کامل توسط نوتروفیل ها انجام نمی شود. بیماران مبتلا به این اختلال بدلیل از بین بردن ناقص میکروب ها (ناقص ماندن فرآیند فاگوسیتوز) گرانولوماتوز همواره با عفونت تب زا و انتشار التهاب گرانولوماتوز در بافتهایشان مواجه هستند که این امر زندگیشان را تهدید می کند. 
تشخیص به موقع و تفریق آن از سایر بیماری هایی که علائم مشابه دارند، برای این بیماران حائز اهمیت بسیار می باشد. 
اندازه گیری غیر مستقیم کاهش گونه های فعال اکسیژن (ROS) مخصوصاً هیدروژن پراکسید تولید شده توسط سیستم NADPH oxidase اساس تست DHRمی باشد. 
در این تست 1,2,3 Dihydrorhodamine در اختیار نوتروفیل های تحریک شده با PMA قرار می گیرد. 
نوتروفیل های سالم پس از بلع این ماده، آن را اکسید نموده که در نتیجه تبدیل به ماده فلوئوروسنت می شود که به وسیله دستگاه فلوسیتومتری قابل شناسایی است.
تست DHR در مقایسه با روش های همانند NBT دارای حساسیت فوق العاده زیادی است و روش بسیار دقیقی برای تشخیص بیماران و خصوصاً ناقلین CGD می باشد. 
در این تست به جای درصد سلولهای سالم اندکس اکسیداتیو نوتروفیل ها (NOI) اندازه گیری می شود. 
در تست DHR ، شدت فلورسانس در حداقل ده هزار نوتروفیل با دستگاه فلوسیتومتر بررسی شده و با نوتروفیل های تحریک نشده مقایسه می گردند 
در حالی که در تست NBT، فاگوسیتوز معمولاً در یکصد سلول و آن هم با میکروسکوپ معمولی و با چشم بررسی می گردد.

 

Name of measurement method:

Flowcytometry (FCM)

Similar names:

DHR)Dihydrorhodamine)

Intervening factors:

• در نمونه حاوی لخته یا همولیز شدید تداخل مشاهده می شود.
• در نمونه هایی که بیش از یک ساعت در دمای اتاق (25 درجه سانتیگراد) مانده باشد.
• دمایی که آزمایش  در آن انجام می شود می تواند بر فعالیت سلول های فاگوسیتوز تأثیر بگذارد و نتایج آزمایش را تغییر دهد.
• PH محلول مورد استفاده در آزمایش  نیز می تواند بر فعالیت سلول های فاگوسیتوز تأثیر بگذارد و نتایج آزمایش را تغییر دهد.
• مصرف داروهایی نظیر ایندومتاسین، ضد بارداری خوراکی (OCP) و تزریق واکسن تیفوئید میتواند منجر به نتایج مثبت کاذب گردد.
• مصرف برخی آنتی بیوتیکها، گلوکوکورتیکوئیدها و سالسیلات باعث کاهش شدت نتایج آزمایش می شوند.

Cases of non-acceptance of samples:

همولیز

Additional information:

شنبه تا چهارشنبه قبل از ساعت 12 ظهر

Answer time: 2 day