علم الوراثة الخلوية

علم الوراثة الخلوية هو علم دراسة بنية الكروموسومات. في هذا العلم، يتم تحليل الكروموسومات باستخدام تقنيات النطاقات أو الطرق الوراثية الخلوية الجزيئية. هو فرع من فروع علم الوراثة يرتبط بدراسة البنية وتركيب الكروموسومات للخلية، والذي يتضمن التحليل الروتيني لكروموسومات G-Band وتقنيات النطاقات الأخرى بالإضافة إلى علم الوراثة الخلوية الجزيئي بما في ذلك FISH وCGH.

IHC الكيمياء المناعية

في الكيمياء المناعية (IHC) باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ومتعددة النسيلة، يتم استخدامه للكشف عن المستضدات وتحديدها وتوزيعها. يتم التعبير عن المستضدات الخاصة بالورم إما في شكل جديد أو يتم زيادتها في الجسم، ومن خلال اكتشافها، يمكن للمرء فهم الحالة الصحية للخلايا المعنية.

من أجل تنفيذ تقنية المناعية الكيميائية، هناك حاجة إلى أخذ العينات والخزعة. بعد إجراء عملية الزوفافت وتحضير العينة على شكل كتلة بارافين، يتم قطع العينات بواسطة مشراح ونقلها إلى شريحة. ثم يتم تحضين هذه العينات بالجسم المضاد المناسب. يمكن تتبع موقع ربط الجسم المضاد بالمستضد بواسطة مجهر تقليدي أو مجهر فلوري باستخدام علامة مثل صبغة فلورسنت أو إنزيم أو عنصر مشع أو ذهب غرواني.

ترتبط هذه العلامات مباشرة بالجسم المضاد الأولي أو الجسم المضاد الثانوي.

تقنية السمك

تم تطوير تقنية التهجين في الموقع بواسطة جال وباردو وكذلك جون وآخرون في عام 1969.لقد أتاحت هذه الطريقة تحديد الجينات أو تسلسلات الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو الحمض النووي (DNA) مباشرة على الكروموسومات. في تقنية FISH، تتفاعل الأحماض النووية المفردة (عادة DNA وأحيانًا RNA) مع بعضها البعض لتكوين مجمعات أو هجينة عن طريق تكوين جزيئات ذات تشابه عالٍ أو تسلسلات تكميلية. بعد تهجين الأحماض النووية، يتم تحديد درجة تماثل التسلسلات. ونتيجة لذلك، يتم تحديد تسلسلات محددة وتقع على كروموسومات معينة

باختصار، هذه التقنية هي من بين التقنيات النسيجية الكيميائية الأولى التي تتضمن استخدام فئات مختلفة من الأصباغ الطبيعية والاصطناعية لصبغ الهياكل الخلوية والمجتمعات داخل الخلايا. هذه المركبات بشكل عام غير محددة وتستخدم لتصنيف جزيئات معينة مثل البروتينات والأحماض النووية والدهون والكربوهيدرات. تم إجراء أول تهجين في الموقع في أواخر الستينيات، والذي لم يستخدم مواد الفلورسنت وبدلاً من ذلك استخدم المجسات الموسومة بالنظائر المشعة.تُستخدم طريقة FISH أيضًا للكشف عن الأحماض النووية وهي بديل للطرق القديمة التي تستخدم المجسات المشعة.تتطلب هذه الطريقة تهجين مسبار الحمض النووي مع الحمض النووي المطلوب في الموقع.

تقنية قياس التدفق الخلوي

القياس الخلوي يعني قياس وفحص مكونات الخلية المختلفة في العينة. يحدد جهاز قياس التدفق الخلوي مكونات الخلية المتعددة ويقوم بإحصائها في وقت واحد. تشمل الخصائص التي يمكن قياسها عن طريق قياس التدفق الخلوي حجم الخلية، والتعقيد السيتوبلازمي، ومحتوى الحمض النووي الريبي (DNA) والحمض النووي الريبي (RNA) في الخلية، ومجموعة واسعة من البروتينات داخل الخلايا أو البروتينات المرتبطة بالغشاء.

في طريقة قياس التدفق الخلوي، يتم وضع الخلايا الملونة في مجرى سائل إما عن طريق الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المرتبطة بالفلورسنت أو الفلوروكروم المرتبطة بالمكونات الخلوية وتمريرها منفردة أمام شعاع الضوء (الليزر) ثم ينثر الضوء وجانبه يتم جمع مضان بواسطة أجهزة الكشف. تقوم هذه الكاشفات بتحويل الإشارات الضوئية إلى إشارات كهربائية تتوافق مع الضوء المجمع. يمكن لتشتت الضوء في زوايا مختلفة أن يميز الخلايا بناءً على الاختلافات في الحجم والتعقيد الداخلي، في حين أن انبعاث الضوء من الأجسام المضادة ذات العلامات الفلورية يمكن أن يميز الخلايا بناءً على الاختلافات في المستضدات السطحية والسيتوبلازمية، وبهذه الطريقة، يمكن تمييز الخلايا بناءً على خصائص مثل حجم التحبيب وكمية التلوين.

IHC الكيمياء المناعية

تعتمد الكيمياء المناعية على اكتشاف الأجسام المضادة للمستضد عن طريق الفحص المجهري الضوئي لتحديد مستضد معين في الأنسجة أو الخلية أو مرحلة معينة من دورة حياة الخلية.
المستضد هو بروتين مرتبط ببنية الخلايا المختلفة، بما في ذلك الخلايا الظهارية للعضلات الملساء، والعضلات المخططة، والخلايا اللمفاوية، أو غيرها.

أهداف استخدام الكيمياء المناعية

• التعرف على طبيعة الخلايا ونوع الأنسجة
يلعب استخدام الكيمياء المناعية في الأورام ضعيفة التمايز أو غير المتمايزة دورًا مهمًا في التشخيص.
في بعض الأحيان يكون من الصعب التمييز بين سرطان الغدد الليمفاوية والسرطانات غير المتمايزة أو سرطان الجلد الخبيث أو حتى الساركوما. في هذه الحالات، يمكن الوصول إلى التشخيص النهائي باستخدام لوحة من العلامات ذات الصلة.
على سبيل المثال، من الممكن التفريق بين سرطان الغدد الليمفاوية وأورام السرطان غير المتمايزة باستخدام علامات Pancytokeratin وLCA (CD45).
أو للتمييز بين الأورام الظهارية والورم الميلانيني الخبيث، يمكن استخدام علامات البانسيتوكيراتين Melan A وHMB45 ويمكن إجراء التشخيص النهائي.
كما أنه من أجل التشخيص النهائي لأورام الغدد الصم العصبية يمكن استخدام علامات تحدد طبيعة الورم ومنشأه، وتعتبر هذه المسألة مهمة من حيث تحديد نوع العلاج للمريض.
العلامات المستخدمة في تشخيص أورام الغدد الصم العصبية هي NSE Chromogranin، Synaptophysin.
وترتبط الصورة المعاكسة بتلطيخ السينابتوفيسين في ورم الغدد الصم العصبية.

طريقة PCR

هذه الطريقة بسيطة للغاية ويمكن إجراء عدة عمليات واحدة تلو الأخرى باستخدام التغيرات في درجات الحرارة. ويمكن استخدام هذه التقنية كوسيلة تشخيصية قوية لوجود الطفرات في الجينوم البشري، أو لإدخال طفرات محددة في الجين المتماثل.

تم إجراء PCR يدويًا عن طريق وضع أنابيب الاختبار وتحريكها بشكل شاق بين حمامات الماء بدرجة الحرارة المطلوبة. اليوم، تتوفر الأجهزة تجاريًا حيث يتم تجهيز محطات الأنفاق بكتل معدنية قابلة للتسخين ويمكن برمجتها للتغيير السريع بين درجات الحرارة المطلوبة. تعمل دورة PCR على تضخيم الحمض النووي المطلوب مرتين.